高效液相色譜法（HPLC）是分析化學(xué)中廣泛使用的一種技術(shù)，在醫(yī)藥、生命科學(xué)、食品、環(huán)境、化工等眾多領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用。而流動(dòng)相在液相色譜中猶如血液循環(huán)系統(tǒng)，其重要性不言而喻。合適的流動(dòng)相選擇與妥善的處理維護(hù)，直接關(guān)系到分析的準(zhǔn)確性、可靠性以及儀器的使用壽命。本文將對(duì)液相色譜流動(dòng)相從選擇到維護(hù)進(jìn)行全方位解析，希望對(duì)大家有所幫助~

一、流動(dòng)相的類型與影響因素

1、流動(dòng)相的類型

正相流動(dòng)相：主要用于正相液相色譜，通常由非極性溶劑（如正己烷、環(huán)己烷）和少量極性改性劑（如異丙醇、二氯甲烷）組成，極性較低，與極性固定相（如硅膠柱）配合。其分離基于分析物極性差異，極性強(qiáng)的分析物在固定相上吸附強(qiáng)、在流動(dòng)相中遷移慢，非極性分析物則相反。它適用于分離極性較強(qiáng)的化合物和異構(gòu)體，對(duì)溶劑純度要求高，極性改性劑比例對(duì)分離效果影響顯著。

反相流動(dòng)相：主要用于反相液相色譜，主要由水和有機(jī)改性劑（如甲醇、乙腈）構(gòu)成，極性相對(duì)較高，與非極性固定相（如 C18、C8 烷基鍵合硅膠柱）協(xié)同作用。分離是根據(jù)分析物疏水性，疏水性強(qiáng)的分析物在固定相上保留時(shí)間長(zhǎng)，極性大的分析物保留時(shí)間短、先被洗脫。它適用于分離非極性至中等極性的化合物，在藥物和生化領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，有機(jī)改性劑種類和比例以及流動(dòng)相 pH 值對(duì)分離效果影響較大。

2、影響流動(dòng)相分離的因素

極性：流動(dòng)相的極性是影響分離的關(guān)鍵因素。極性流動(dòng)相利于分離極性化合物，非極性流動(dòng)相則適合非極性化合物。在反相色譜中，通過(guò)改變水性流動(dòng)相中有機(jī)改性劑與水的比例，可調(diào)節(jié)極性。

例如：增加甲醇或乙腈比例，流動(dòng)相極性降低，非極性分析物的保留時(shí)間延長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)更好的分離效果。

粘度：粘度影響流動(dòng)相流速和壓力。較高粘度的流動(dòng)相需要更高壓力驅(qū)動(dòng)，可能影響色譜柱壽命和分離效率?？赏ㄟ^(guò)改變?nèi)軇┏煞?、溫度或壓力調(diào)節(jié)粘度。

例如：降低溫度可能增加某些溶劑的粘度，在實(shí)際操作中需綜合考慮。

pH值：pH值影響分析物和固定相電離狀態(tài)。根據(jù)分析物和固定相的 pKa 值調(diào)節(jié) pH 值至關(guān)重要。

例如：分離酸性化合物可采用堿性流動(dòng)相，使酸性分析物呈離子態(tài)，減少與固定相的作用而加快洗脫；分離堿性化合物則采用酸性流動(dòng)相。

離子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度通過(guò)改變分析物與固定相之間的靜電相互作用影響分離效率。通過(guò)調(diào)整溶液中鹽或緩沖液濃度可改變離子強(qiáng)度。例如：增加鹽濃度可增強(qiáng)離子對(duì)作用，改變分析物保留行為。

流動(dòng)相的純度、過(guò)濾、脫氣和穩(wěn)定性對(duì)分析準(zhǔn)確性和可靠性至關(guān)重要。高純度流動(dòng)相可避免雜質(zhì)影響；過(guò)濾去除顆粒物和微生物；脫氣防止氣泡影響峰形；穩(wěn)定性確保長(zhǎng)時(shí)間使用質(zhì)量不變。

二、流動(dòng)相的選擇與配置

流動(dòng)相配制的質(zhì)量直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果成功與否。這里著重說(shuō)一下流動(dòng)相如何選擇，以及影響流動(dòng)相質(zhì)量的過(guò)濾和脫氣。

●  溶劑 / 水純度要求

1、對(duì) HPLC 分析的影響

實(shí)驗(yàn)方法方面：有機(jī)溶劑或水純度差會(huì)影響基線，導(dǎo)致噪音變大、漂移，雜質(zhì)產(chǎn)生額外紫外吸收會(huì)出現(xiàn)鬼峰，甚至影響分離度。水中電解質(zhì)可能影響色譜峰峰形。

儀器本身方面：低質(zhì)量的水或有機(jī)溶劑引入顆粒物，堵塞色譜柱或過(guò)濾芯，影響儀器性能，增加維護(hù)成本。

2. 有機(jī)溶劑純度

應(yīng)選擇色譜純?nèi)軇瘜W(xué)純、分析純等通用試劑純度分類不適用于液相色譜，而農(nóng)殘級(jí)、光譜純、色譜純等是根據(jù)儀器分析技術(shù)或特殊領(lǐng)域分類，色譜純?nèi)軇┛蓽p少雜質(zhì)對(duì)分析的干擾。

3. 水的純度

推薦使用純水儀制水，電阻率達(dá)到 18.2MΩ 方可使用。高純度水可避免水中雜質(zhì)對(duì)分析的不良影響，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。

●  過(guò)濾

1. 流動(dòng)相過(guò)濾

濾膜材質(zhì)多樣，有適合水相、有機(jī)相及兼容兩者的。但兼容濾膜易被有機(jī)相溶解，故不能用過(guò)濾水的濾膜過(guò)濾有機(jī)相或混合流動(dòng)相，以免引入雜質(zhì)堵塞系統(tǒng)。對(duì)于常規(guī)色譜柱，0.45μm 濾膜可滿足要求；UHPLC 因色譜柱填料小，建議使用 0.2μm 濾膜。

2. 樣品過(guò)濾

樣品中的顆粒物也會(huì)堵塞系統(tǒng)和色譜柱，所以樣品過(guò)濾必不可少。樣品過(guò)濾膜也有針對(duì)水相和有機(jī)相之分及兼容類型。樣品過(guò)濾建議步驟為：先吸入空氣再吸入樣品，翻轉(zhuǎn)注射器擦凈頂端殘留物并固定過(guò)濾膜，過(guò)濾后注入樣品瓶。

3. 在線過(guò)濾器

部分液相系統(tǒng)可安裝在線過(guò)濾器，其篩板安裝在自動(dòng)進(jìn)樣器與色譜柱之間，可進(jìn)一步保護(hù)色譜柱，攔截可能進(jìn)入色譜柱的顆粒物和雜質(zhì)。

●  脫氣

流動(dòng)相使用前必須脫氣，以去除溶解氣體。否則氣體會(huì)降低柱填料性能，干擾檢測(cè)器信號(hào)。

1. 超聲波脫氣

將流動(dòng)相連容器放入超聲水槽中脫氣10 - 20min，簡(jiǎn)便且基本滿足日常需求，不影響溶劑組成。但超聲時(shí)需避免容器與槽底或壁接觸，防止玻璃瓶破裂，且容器內(nèi)液面不宜高出水面過(guò)多。

2. 氦氣脫氣

氦氣通過(guò)流動(dòng)相可有效除去溶入氣體，10min 內(nèi)可去除 80% - 90%。有機(jī)溶劑中氣體較易脫除，水溶液中氣體較難。該方法在電化學(xué)檢測(cè)中常用。

3. 真空脫氣

貯液器抽成部分真空使溶入氣體蒸發(fā)形成氣泡溢出，效果僅次于氦氣脫氣。目前多數(shù)高效液相色譜儀配置在線脫氣機(jī)模塊，但僅適用于脫氣后流動(dòng)相在使用過(guò)程中的微量脫氣。

三、流動(dòng)相的儲(chǔ)存

流動(dòng)相過(guò)濾好之后，在放置時(shí)需要注意溶劑瓶的使用。大多數(shù)有機(jī)相可以直接放置在透明瓶?jī)?nèi)，而水相、乙腈、四氫呋喃、乙醚等則建議放置在棕色瓶?jī)?nèi)。

如果水相放置在透明溶劑瓶?jī)?nèi)，光照會(huì)加速微生物的滋生。如果乙腈放置在透明溶劑瓶?jī)?nèi)，光照會(huì)加速聚合形成粘稠的聚合物，影響體系的穩(wěn)定性等。

四、流動(dòng)相的維護(hù)

1. 定期更換與避光流動(dòng)相直接接觸儀器管線和色譜柱，保持其良好狀態(tài)對(duì)儀器和色譜柱性能至關(guān)重要。應(yīng)定期更換流動(dòng)相，預(yù)防變質(zhì)。因?yàn)樗?、緩沖鹽和大部分有機(jī)相隨時(shí)間推移成分變化，極性改變，導(dǎo)致保留時(shí)間漂移、重現(xiàn)性差。

2. 緩沖鹽的存放與更換緩沖鹽應(yīng)密封保存于棕色瓶并冷藏，可延長(zhǎng)使用時(shí)間約一周。若保存不佳，對(duì)色譜柱影響可能不可逆，故條件允許時(shí)現(xiàn)用現(xiàn)配最為穩(wěn)妥。

3. 水的更換若有機(jī)相受光照影響小，可用棕色瓶放水，建議每天換水，至少兩天換一次，以減少水變質(zhì)對(duì)系統(tǒng)和色譜柱的影響。儀器長(zhǎng)時(shí)間不開(kāi)機(jī)時(shí)，應(yīng)將水換成有機(jī)相并開(kāi)機(jī)置換管線內(nèi)的水，防止微生物滋生。

4. 有機(jī)溶劑的穩(wěn)定性部分有機(jī)溶劑如四氫呋喃、氯仿和二氯甲烷等穩(wěn)定性差，建議購(gòu)買小體積包裝，每次取完后擰緊瓶蓋減少氧氣影響。對(duì)于乙腈等較穩(wěn)定的有機(jī)溶劑，長(zhǎng)時(shí)間不使用儀器時(shí)，避免純乙腈充滿液相系統(tǒng)，防止其聚合對(duì)儀器產(chǎn)生不良影響。

溫馨提示：

如果存在無(wú)法解決問(wèn)題，建議咨詢專業(yè)工程師，做進(jìn)一步的故障排查；如需更換配件等，請(qǐng)聯(lián)系專業(yè)工程師進(jìn)行維修維護(hù)。