用液相的時候發(fā)現(xiàn)，一步步按照要求跑出來的峰卻“胖胖的”，細(xì)數(shù)影響峰形的因素：流動相的組成和pH？色譜柱的污染、堵塞或塌陷？方法中的進(jìn)樣量、流速和采集頻率？堿性化合物和硅羥基的次級作用？溶劑效應(yīng)？組分共流出？排查時不怕不正常，就怕都正常，此時內(nèi)心只想仰天長嘯一句“為什么”？其實(shí)，還有一個隱藏更深且更常見的因素：死體積。

1、什么是死體積？

死體積是色譜優(yōu)化過程中的重要指標(biāo)。死體積狹義上是指在色譜分析中，從?進(jìn)樣器到?檢測器之間，色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積，即色譜柱內(nèi)流動相的體積。廣義上的死體積是指進(jìn)樣位置（進(jìn)樣口）到檢測位置（檢測器流通池）這一段的體積（PS:除去色譜柱中填料體積），一旦色譜柱連接，這段體積（圖示橙色管路）是不變的（死的）。

2、死體積有哪些影響？

死體積主要會導(dǎo)致峰展寬，從而影響分離度。若峰展寬大，峰就會變矮變胖，分離效果自然就會受到影響。

3、死體積怎么計算？

對于HPLC來說，該如何計算死體積呢？先來一起了解一下定義：死體積(dead volume，V₀)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分：進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙（被流動相占據(jù)，V_m）、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有V_m參與色譜平衡過程，其它3部分只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展，這3部分體積應(yīng)盡量減小。死時間(dead time，t₀)——不保留組分的保留時間。即流動相（溶劑）通過色譜柱的時間。測量系統(tǒng)死體積通常需要通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測量，常用方法是通過進(jìn)一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液時，就會得到一個色譜峰，由此峰可以測得死時間（t₀），這就是t0的實(shí)測結(jié)果。然后通過計算得到系統(tǒng)死體積：

死體積（V₀) = 死時間t₀×流動相的流速F

4、怎樣消除死體積的影響？

減少死體積的方法主要包括：減少連接管路的長度，縮小連接管路的直徑，用死體積小的檢測池，用粒度小的色譜填料。在減少管路長度的過程中，就特別考驗(yàn)大家的經(jīng)驗(yàn)與手法，另外，液相使用處處皆細(xì)節(jié)，在日常操作和維護(hù)中，要注意：

（1）在我們維護(hù)儀器的過程中，如果涉及到備件更換，應(yīng)選擇跟原來一致的規(guī)格，確保新管線的長度和內(nèi)徑、流通池體積等規(guī)格一致，且正確安裝，避免死體積增加帶來峰形擴(kuò)展；

（2）接裝色譜柱時，也需要確保管線接頭匹配完好（特別注意peek管接頭的使用）避免形成接頭空腔；

（3）如果色譜柱內(nèi)徑越窄，體積越小，則受柱外死體積的影響越大。所以，在選擇或安裝色譜柱時，需要確保管線接頭與色譜柱的接頭匹配，避免因額外的混合腔造成死體積增加帶來峰形擴(kuò)展。